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熒光PCR凍干-DTT

發(fā)布時間:2020-07-27   點擊次數(shù):3822次

二硫蘇糖醇(簡稱為DTT)是一種小分子有機還原劑,其還原狀態(tài)下為線性分子。DTT有什么特點?怎么保存呢?DTT是一種常用還原劑,有抗氧化作用,進口分裝。DTT和巰基乙醇相比, DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。另外DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時,兩者效果相近。DTT一般保存條件為-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。由于容易被空氣氧化, DTT的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長它的使用壽命。DTT作為PCR的添加劑與DMSO、甜菜堿、BSA混合配制成的復(fù)合型添加劑,按照一定比例配比,能獲得PCR擴增特異性和很高的PCR擴增產(chǎn)量。PCR的擴增反應(yīng)并不是可以無窮地進行下去的,經(jīng)過一定的循環(huán)周期后需擴增的片段不再按指數(shù)增多而逐漸進入平坡;進入平坡的循環(huán)次數(shù),取決于起始時存在的模板拷貝數(shù)以及合成的DNA總量。所謂平坡就是批PCR循環(huán)的后期,合成產(chǎn)物達(dá)0.3~1pmol時,由于產(chǎn)物的堆積,使原來以指數(shù)增加的速率變成平坦的曲線。

試劑凍干機Pilot3-6T應(yīng)用示例(熒光PCR凍干):

  1. 探針、底物、引物原料要求確定。
  2. 凍干溶液配方開發(fā),采用正交法或響應(yīng)曲面法進行輔料篩選。
  3. 選擇適合的包材和模具。
  4. 設(shè)計凍干曲線配合輔料篩選。
  5. 確定配方及工藝。
  6. 穩(wěn)定性測試。
  7. 根據(jù)穩(wěn)定性測試結(jié)果修正工藝或配方。
  8. 整個環(huán)節(jié)注意環(huán)境、設(shè)備、人員的結(jié)合。

 

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